أهم البروتوكولات التجريبية: بعد قراءة عدة مقالات
الوسائل وطريقة العمل:
1-الدراسة على الحيوانات:
تم إجراء التجربة على جرذان تزن 200 ±20غ، وضعت الجرذان في أقفاص بلاستيكية مصنوعة من polypropylène في شروط خاصة من درجة الحرارة 25 ±ºC5 ودورة ظلامية مدتها 12ساعة مع السماح لها بالوصول للغذاء والماء(حمية بيلي pellet).
2-بروتوكول التجربة:
قسمت الحيوانات ل8مجموعات مكونة من 6جرذان في كل مجموعة وتم معاينتها عن طريق الفم لمدة 15يوم.
(ملاحظة لم أتطرق لتقسيمات المجموعة وكتبتها على الكراس مثلما أشرت)
بعد 24ساعة من آخر جرعة تم تخدير الحيوانات و سحب الدم عن طريق الوريد الصافن(القلب) ووضعه في انابيب خاصة بسحب الدم، ثم بعد نحر الحيوان تم استئصال الكبد وغسله بمحلول ملحي ثم تنشيفه بورق ترشيح.
(في هذه التجربة تم استعمال جرذان بينما في تجربتنا نستعمل فئران فيكون هناك تغير في وزن الحيوان وحجمه طبعا، علما أن معظم المقالات استعملت جرذان)
المرجع:
[ندعوك للتسجيل في المنتدى أو التعريف بنفسك لمعاينة هذا الرابط] البروتوكول الثاني:
1-الدراسة على الحيوانات:
أجريت التجربة على جرذانWistar albino تزن160 -200غ، قبل الشروع في التجربة تم الاحتفاظ بالجرذان شروط خاصة من درجة الحرارة 25-27ºCودورة ظلامية مدتها 12ساعة ورطوبة نسبية (55 ± 5)%مع السماح لها بالوصول للغذاء والماء(حمية بيلي pellet).
2-تحضير المستخلص النباتي: مستخلص نباتي لنبات آخر غير CNICUS
3-السمية الكبدية باستعمال البراسيتامول:
البراسيتامول هو مسكن يستعمل لخفض درجة حرارة الجسم، وفي حالة أخذ جرعات كبيرة يتسبب في ضرر كبدي حاد حيث أن الرابطة التساهمية المتشكلة بين المادة المؤكسدة الخاصة بالبراسيتامول , N-acetyl-p-benzoquinoneimine و مجموعات sulphydryl الخاصة بالبروتين تؤدي لنخر الخلايا وأكسدة الدهون مما يسبب تسمم كبدي يؤدي للزيادة في الإنزيمات الكبدية SGOT, SGPT, ALP and bilirubin.
4-تقسيم الحيوانات لمجموعات.
بعد 24ساعة من آخر جرعة يتم سحب الدم بطريقة retro-orbital plexus(سحب من العين) وتركه يتجلط في أنابيب خاصة لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة ثم يتم فصل المصل عن طريق الطرد المركزي (2500 دورة لمدة 15د).
يجمع المصل لتحليله وفقا لمعطيات بيوكيميائية.
5- التحقق من وظيفية الكبد:
يتم تحليل المصل تبعا لعدة معايير: ,SGOT/AST, SGPT/ALT, ALP, TB and total protein، يتم قياس نشاط مصل transaminase بطريقة Rietman and Frankel بينما ALP و مصل bilirubin باستعمال طريقةScand
6-دراسة نسيجية للكبد:
بعد نحر الجرذان تم فصل الكبد وتنظيفه بماء مالح ثم نقله لمحلول فورمالين قاعدي10%، بعد أسبوع تم تنشيف الكبد باستعمال سلسلة من محاليل الإيثانول، ثم غمره في البرافين وإجراء مقطع 5毺m ثم تلوينه بمادة haematoxylin-eosin وإجراء ملاحظات بالمجهر الضوئي.
7- تحليلات احصائية: (عبارة عن جدول به مختلف التغيرات التي حدثت بالنسبة للإنزيمات المستخلصة من كبد كل مجموعة مقارنة بالمجموعة الشاهدة).
المرجع:https://sci-hub.se/https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S2221169112600550
البروتوكول الثالث:
الطرق والوسائل:
1-تحضير المستخلص النباتي: مستخلص نباتي لنبات آخر
2-الدراسة على الحيوانات:
أجريت التجربة على جرذان تزن 165 -180غ، تم ترك الحيوانات في شروط معينة لمدة أسبوعين من أجل التأقلم تتمثل في حمية غذائية(حمية بيلي) خاصة بالجرذان مع دورة ظلامية مدتها 12ساعة ودرجة حرارة الوسط ºC21-25ºC.
وضعت الجرذان في صناديق خاصة وقسمت لخمس مجموعات بحيث أن وزن كل مجموعة 174±2غ.
تم سحب ومنع الوصول للطعام دون الماء(متوفر) يوم قبل الحقن.
3-تقسيم الحيوانات لخمس مجموعات ومعاينة كل مجموعة على حدى.
4-بعد ساعتين من الحقن بالمادة المسممة والمسببة لتسمم الكبدي carbon tetrachloride تم معاينتها بالمادة المستخلصة من النبتة عن طريق الفم .
5-طرق التحليل البيوكيميائي:
*Malondialdehyde and a-L-fucosidase تقاس لونيا colorimetrically (spectrophotomètre).
*Glutamic-oxaloacetic transaminase (AST),glutamic-pyruvic transaminase (ALT) بطريقة (Reitman and Frankel, 1957).
* alkaline phosphatase بطريقة ((Belfield and Goldberg, 1971) لونيا.
* triglycerides, cholesterol and HDL تم قياسها أيضا لونيا بطريقة (Richmond, 1973; Fassati and Prencipe, 1982).
*تم حساب (mg/dl)LDL بطريقة (Friedewald et al., 1972) كالآتي:
(5/LDL = Total CHL- HDL -(TG
6-دراسة نسيجية:
تم أخذ عينات من كبد جرذ من كل مجموعة وتثبيتها في فورمول 10% لمدة 24ساعة ثم غسلها بماء مقطر ثم غسلها بتخفيفات عديدة من الكحول(إيثيل) لنزع الماء.
ثم تغمر العينات في برافين لتحضير مقاطع سمكها 4 ميكرومتر، توضع المقاطع على ساترات زجاجية ثم يتم نزع البرافين وتلون بhematoxylin و eosin لإجراء المعاينة المجهرية.
7- مجموعة جداول تظهر نتائج تأثير المادة المسممة والعلاج على الوزن والغذاء المستهلك ووزن الكبد
جداول خاصة بدراسة التأثير على SGOT, SGPT and ALP (IU/L).و أيضا GSH (mg/dl), and MDA (nmol/ml).
المرجع:https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0278691509005936
ملاحظة: تم أخذ بروتوكولات التسمم الكبدي المذكورة من مقالات خاصة بأنواع نباتية أخرى بسبب قلة أو بالاحرى انعدام المقالات التي تتحدث عن علاقة Cnicus benedictus بالتسمم الكبدي فدائما ما يتم ذكر ان العلماء بصدد البحث عن ذلك بينما وجدنا مقالات تتحدث عن التسمم الكبدي وتأثيرعلاجي لنباتات أخرى عليه فأخذت منها المعلومات
ثم قمت بالبحث عن برتوكولات تحضير مستخلص النبتة CNICUS من مقالات مغايرة خاصة بأغراض علمية غير التسمم الكبدي:
1-تحضير المستخلص النباتي:
يتم تجفيف أوراق وجذور نبتة Cnicus benedictus في درجة حرارة 35-40 درجة لتقليل المحتوى المائي. لتحضير المستخلص أخذ 10غ من المسحوق ووضع في قارورة ثم أضيف له 100مل من الميثانول 99 % و رج باستعمال رجاج
(Promax 2020; Heidolph, Schwabach, Germany) في درجة حرارة الغرفة ولمدة 24ساعة، ثم يتم تعريضه للصوتنة ب ultrasonicator (ultrasonic Elma Scmidbauer GmbH)، يرشح الخليط بورق (Whatman) ثم يحفظ في rotary evaporator في درجة حرارة 40، يخفف المسنخلص بحجم قليل من الميثانول ويحفظ في درجة حرارة 4د حتى الاستعمال.
المرجع:https://www.agrifoodscience.com/index.php/TURJAF/article/view/1054/488
سأبحث عن طرق أخرى علما انني وجدت ان الجزء المستعمل لدراسة التسمم الكبدي هو الجزء الخضري الأوراق بينما لدراسة اندمال الجروح هو الجزء الجدري.
المرجع:
[ندعوك للتسجيل في المنتدى أو التعريف بنفسك لمعاينة هذا الرابط] 
الرئيسية 